單質(zhì)砷無毒性，砷化合物均有毒性。三價砷比五價砷毒性大，約為60倍；有機砷與無機砷毒性相似。砷的許多化合物都含有致命的毒性，常被加在除草劑、殺鼠藥等。為電的導(dǎo)體，被使用在半導(dǎo)體上?；衔锿ǚQ為砷化物，常運用于涂料、壁紙和陶器的制作等。在長期食用含無機砷的藥物、水以及工作場所暴露砷的人會產(chǎn)生腸胃、肝臟、腎臟、心血管系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)等病變，因此，對于檢測水質(zhì)中砷的技術(shù)開發(fā)隨之而來。

對水質(zhì)中的As(Ⅲ)檢測檢測方法主要有氫化物原子熒光法、石墨爐原子吸收法、電感耦合等離子體質(zhì)譜法、X—射線熒光法等。但這些方法往往還需要大量的預(yù)處理，增加了很多成本，而且對操作人員有很高的技術(shù)要求，所以不能滿足社會對實際樣品檢測的日益增加的需求。 

核酸適配體是一小段經(jīng)體外篩選得到的寡核苷酸序列，能與相應(yīng)的配體進行高親和力和強特異性的結(jié)合，它的出現(xiàn)為化學(xué)生物學(xué)界和生物醫(yī)學(xué)界提供了一種新的高效快速識別的研究平臺，并在許多方面展示了良好的應(yīng)用前景。隨著As(Ⅲ)及其核酸適配體的發(fā)現(xiàn)，有學(xué)者利用As(Ⅲ)和其核酸適配體的特異性結(jié)合作用，構(gòu)建了對As(Ⅲ)檢測的生物傳感器，這類傳感器具有選擇性好，特異性好的優(yōu)點，成為最近研究的熱點。

實時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(RT-qPCR)技術(shù)是在普通PCR的基礎(chǔ)上建立起來的一種新型生物技術(shù)，該技術(shù)不僅實現(xiàn)了對模板DNA的定量分析，并且更加簡單高效，可以同時處理大量樣品，而且具有很好的準(zhǔn)確性和特異性，減少了PCR實驗過程中常出現(xiàn)的污染問題。實時熒光定量PCR以熒光共振能量轉(zhuǎn)移為基礎(chǔ)，通過對PCR擴增反應(yīng)過程中熒光信號的實時檢測從而實現(xiàn)對模板DNA定量的分析。在實時熒光定量PCR反應(yīng)過程中，熒光信號隨著實時熒光定量PCR對模板DNA的指數(shù)級擴增而增加，當(dāng)反應(yīng)體系的熒光強度達到所設(shè)定的閾值時，此時體系所經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)即為Ct值。其中Ct值與起始模板DNA濃度有一定的線性關(guān)系，可以通過建立標(biāo)準(zhǔn)曲線實現(xiàn)對模板DNA濃度的定量分析。目前該技術(shù)已經(jīng)在生物檢測、化學(xué)分析等領(lǐng)域得到了廣泛的應(yīng)用。

我們利用As(Ⅲ)及其核酸適配體，基于實時熒光定量PCR技術(shù)，開發(fā)了一種操作簡單、高選擇性、高靈敏性的生物傳感器，用以檢測水中As(Ⅲ)的含量，實現(xiàn)As(Ⅲ)的簡便、快速的檢測。本發(fā)明的目的是提供一種確定樣品中砷濃度的方法，可實現(xiàn)水中As(Ⅲ)的簡單、快速、高靈敏檢測。

本發(fā)明通過以下技術(shù)方案來實現(xiàn)：

(1)PCR管壁上吸附上鏈霉親和素；

(2)能夠特異性識別砷離子的核酸適配體的5’端進行生物素化修飾，在生物素和鏈霉親和素的結(jié)合作用下，核酸適配體吸附在PCR管壁上；

(3)核酸適配體與互補DNA片段結(jié)合； 

(4)待測樣品中的砷離子與核酸適配體結(jié)合，導(dǎo)致互補DNA片段與PCR管壁分離；

(5)用緩沖液將分離的互補DNA片段沖洗掉；

(6)熒光定量PCR，通過檢測體系中的Ct值確定砷離子的濃度。

本發(fā)明的優(yōu)點是：開發(fā)了一種操作簡單、高選擇性、高靈敏性的生物傳感器，用以檢測水中As(Ⅲ)的含量，實現(xiàn)As(Ⅲ)的簡便、快速的檢測。