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一種榆黃蘑菌株及其雜交育種方法

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持有方:高校/科研院所
發(fā)布日期:2025-04-20
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榆黃蘑味道鮮美、營養(yǎng)價值高,同時具有降脂、保肝、抗癌等下作用,但目前商業(yè)化栽培規(guī)模較小,主要原因是菌株的生產(chǎn)性狀不穩(wěn)定。

榆黃蘑含有豐富的蛋白質(zhì)、氨基酸和維生素,具有很高的營養(yǎng)價值;蛋白質(zhì)含量在菌蕾階段最高。其屬于中溫型真菌,不耐高溫;在生長階段不需要光線,對氧要求不高,但需要通風(fēng)。榆黃蘑子實體呈淺黃或金黃色,菌蓋為喇叭狀,表面光滑,邊緣平展呈波浪狀;多數(shù)子實體合生在一起,菌蓋層疊簇生,艷麗美觀。

榆黃蘑的人工栽培最早開始于20世紀(jì)70年代,當(dāng)時王柏松等人用菇木菌絲分離的方法獲得了長白山野生榆黃蘑菌種,并對其生物學(xué)熱性進行了研究。近年來,報道研究主要集中在提高榆黃蘑產(chǎn)量的栽培技術(shù)和因地制宜、選擇原料降低成本的方法;如有研究報道,在常規(guī)配方中加入30-50%的工廠化金針菇菌渣,不會對榆黃蘑產(chǎn)量造成很大影響,但卻能夠降低成本。但這些研究對于推廣榆黃蘑人工種植、提高其產(chǎn)量作用甚微,菌種生長性狀的優(yōu)異及穩(wěn)定性才是其核心關(guān)鍵內(nèi)容。

傳統(tǒng)的菌種選育方法有誘變育種、雜交育種和基因工廠育種。其中雜交育種是目前食用菌新品種選育中使用最廣泛、收效最明顯的育種手段。食用菌雜交育種包括單孢雜交、雙單雜交和多孢雜交三種方法。單孢雜交過程包括單孢收集、單核親本交配及篩選(鏡檢鎖狀聯(lián)合,結(jié)實性驗證、生產(chǎn)性能比較)。雜交育種的目的在于使雙親的優(yōu)勢性狀集中在一起或克服某一親本的劣勢,因 此該方法具有定向性。

自日本千原1970年報道,從香菇中分離出一種抗腫瘤多糖而轟動整個醫(yī)藥界后,全世界掀起了一股將食用菌多糖研究相結(jié)合,共食用菌中尋找抗新興藥物資源的熱潮。榆黃蘑多糖也具有抗腫瘤活性,可將其開發(fā)為新型的抗腫瘤藥物。然而,現(xiàn)有的榆黃蘑胞外多糖含量較低,不適合規(guī)模化提取。

本發(fā)明的目的是提供一株具有優(yōu)良生長性狀的榆黃蘑菌株,本發(fā)明還提供上述榆黃蘑菌株雜交育種的方法,通過單核雜交育種方法,可得到生長性能優(yōu)異,遺傳穩(wěn)定性好的雜交子菌株,該菌株多糖含量高于現(xiàn)有的野生型菌株。

本發(fā)明的技術(shù)方案是:

一種榆黃蘑菌株,其特征在于所述榆黃蘑菌株為Pleurotus citrinopileatus 2-2榆黃蘑2-2,該菌株的保藏號為CCTCC NO:M 2016384。上述菌株P(guān)leurotus citrinopileatus 2-2,榆黃蘑2-2的保藏單位:中國典型培養(yǎng)物保藏中心;地址:湖北省武漢市武昌區(qū)八一路299號;保藏日期:2016年7月11日;保藏號:CCTCC NO:M 2016384。

上述榆黃蘑菌株雜交育種方法:

(1)孢子收集:取發(fā)育健壯、無病蟲害、尚未開傘的供試菌株的子實體,用酒精棉擦拭其表面,然后用無菌水進行沖洗數(shù)次后置于超凈工作臺吹干待用;用滅過菌的解剖刀切取帶菌褶的子實體塊,大小為2×2cm;用無菌鐵鉤的一端勾住子實體塊,鉤子另一端掛在裝有10mL無菌水與3顆玻璃珠的三角瓶的瓶口,使子實體正好懸掛于三角瓶中,菌褶面朝下;用無菌棉塞封住瓶口,在25℃恒溫培養(yǎng)箱中放置24h,制得孢子懸浮液。

(2)單孢分離:逐級稀釋孢子懸浮液,稀釋至400倍顯微鏡視野中含1~3個孢子,此時濃度為最佳稀釋濃度;移取0.5mL最佳稀釋濃度孢子懸浮液至固體培養(yǎng)基上,涂布,在25℃下,倒置遮光培養(yǎng)4-5d;所述固體培養(yǎng)基中含有質(zhì)量百分比為20%的馬鈴薯,2%的葡萄糖和1.8%的瓊脂,固體培養(yǎng)基為自然pH值。

(3)單核菌絲鑒定:當(dāng)菌落長至直徑為3-4cm時,挑取邊緣菌絲,制水 片,置于高倍顯微鏡下觀察,若無鎖狀聯(lián)合,即可認為是單核菌絲。

(4)雜交配對:用直徑為0.5cm的金屬打孔器將兩個親本單核菌絲接種到同一平板培養(yǎng)基上,兩者相距2cm,于25℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng);單核菌株配對采用全排列組合,兩兩配對。

(5)雜交菌株的鑒定:通過鏡檢鎖狀聯(lián)合和拮抗實驗篩選得到雜交菌株。

(6)雜交后代菌株的篩選:采用平板菌絲生長速度檢測、搖瓶液體發(fā)酵培養(yǎng)、菌絲胞內(nèi)多糖含量檢測及對綠霉抗性的實驗,篩選得到性狀較優(yōu)的雜交后代。

本發(fā)明的優(yōu)點是:通過單核雜交育種方法,可得到生長性能優(yōu)異,遺傳穩(wěn)定性好的雜交子菌株,該菌株多糖含量高于現(xiàn)有的野生型菌株。


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