菠菜果實來源于藜科菠菜屬植物菠菜（Spinacia oleracea L.）的果實，菠菜既可食用，又能做藥用，其藥用最早見于唐代《食療本草》，據(jù)《中華本草》記載，菠菜具有止血、養(yǎng)血、平肝、潤燥之功效，而菠菜果實（又稱菠菜子、菠薐菜子）具有清肝明目，止咳平喘之效，主治風(fēng)火目赤腫痛，咳喘。菠菜果實含有小龍骨素B、蛻皮甾酮、α-菠菜甾醇、豆甾烯醇、豆甾烷醇等，前期預(yù)實驗研究發(fā)現(xiàn)菠菜果實（菠菜種子）中含有β-蛻皮激素，β-蛻皮激素能促進人表皮細胞的分化，能對慢性腦血管痙攣具有治療作用，是菠菜果實活性物質(zhì)之一。

菠菜在種植過程中會發(fā)生變異、變種現(xiàn)象，出現(xiàn)栽培學(xué)上的“圓葉菠菜”、“尖葉菠菜”，兩種菠菜果實都容易和其他植物果實混淆，如“尖葉菠菜”果實多具有刺，極像蒺藜果實，僅憑性狀特征難以鑒別其真?zhèn)?，目前缺乏菠菜果實或干燥果實快速、準確的薄層色譜定性鑒別體系，制約菠菜果實的資源開發(fā)利用和作為藥用原料的應(yīng)用。

本發(fā)明的目的是提供一種菠菜果實的質(zhì)量控制方法，以解決目前缺乏定性定量鑒定菠菜果實真?zhèn)魏唾|(zhì)量評價的方法。

為了達到上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案為：

一種菠菜果實的質(zhì)量控制方法，該方法采用薄層色譜法鑒別菠菜果實中特征性化學(xué)成分或采用高效液相色譜法控制菠菜果實中指標性成分β-蛻皮激素。

層色譜法包括以下步驟：

A、供試品制備：

取菠菜果實粗粉0.5-20重量份，加甲醇1-200體積份，密塞稱量后加熱回流提取或超聲波提取1-60min，取出放冷至室溫，用甲醇補足減失重量，濾過，將濾液濃縮至0.1-20體積份，于-4- -20℃下低溫處理0.5-24h，再次濾過，即得到菠菜果實供試品溶液；低溫條件與室溫形成溫差梯度，從而改變供試品溶液的溶解性，影響溶質(zhì)在溶劑中的分配，加之種子類材料富含油脂、蛋白質(zhì)、糊精、淀粉等成分，此類成分鑒別專屬不明顯，容易造成干擾，在溫度較高條件下可一定程度溶于甲醇，在低溫條件下則易聚集、凝結(jié)，其他被檢測類成分和雜質(zhì)形成溶解差，需要至少0.5h才能形成較好的溶解分配差，再次過濾能夠除去雜質(zhì)及其他影響鑒別的干擾成分，使被檢測成分鑒別專屬性更好，更靈敏；

B、對照品制備：

取β-蛻皮激素對照品0.01-0.5重量份，加甲醇1-10體積份，制成β-蛻皮激素對照品溶液作為母液；精密吸取上述母液0.04-0.4體積份，加甲醇1-10體積份，制成β-蛻皮激素目標濃度溶液；

C、薄層色譜鑒別：

吸取步驟A和步驟B的兩種溶液各0.01-0.05體積份，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇的體積比1-15：0.2-4為展開劑，薄層板置于展開缸中飽和5-40min，展開，取出，晾干，噴以0.1-20%硫酸乙醇溶液，加熱或熱風(fēng)吹至斑點于日光下顯色清晰，置紫外光燈365nm下檢視。

高效液相色譜法包括以下步驟：

A、供試品制備：

取菠菜果實0.5-20重量份，精密稱定，置錐形瓶中，精密加甲醇1-200體積份，密塞，稱量，超聲處理1-60min，取出，放冷，用甲醇補足減失重量，濾過，取續(xù)濾液作為菠菜果實供試品溶液；

B、對照品制備：

取β-蛻皮激素對照品0.01-0.5重量份，加甲醇1-10體積份，制成β-蛻皮激素對照品溶液作為母液；精密吸取上述母液0.04-0.4體積份，加甲醇1-10體積份，制成β-蛻皮激素目標濃度溶液；

C、高效液相色譜測定：

分別吸取步驟A得到的菠菜果實供試品溶液和步驟B得到的β-蛻皮激素對照品溶液各0.005-0.05體積份，注入高效液相色譜儀，測定，色譜條件為：固定相：反相C18色譜柱；流動相：乙腈-水；洗脫方式：梯度洗脫，梯度洗脫時流動相中乙腈的體積比隨時間變化為：0-4min，18-22%；4-8min，18-25%；8-15min，25-19%；15-20min，23-18%；流速：0.2-1.2ml/min；檢測波長：240-254nm；柱溫：20-45℃。β-蛻皮激素(CAS NO：5289-74-7,MF：C27H44O7)屬于甾酮類物質(zhì)，含有多元酚羥基，空間結(jié)構(gòu)復(fù)雜，極性較大，易溶于乙醇，在丙酮中略溶，在乙酸乙酯、氯仿及熱水中微溶，在乙醚中幾乎不溶。對其吸收波長和檢測條件進行分析和實驗，在最大吸收波長條件下，其檢測等度洗脫效果一直不理想，因此，為了達到更好的分離和檢測效果，在進一步優(yōu)化流動相種類的基礎(chǔ)上，改變等度洗脫方法，采取梯度洗脫，最終菠菜果實中β-蛻皮激素HPLC檢測條件滿足要求，可準確、快速檢測菠菜果實中β-蛻皮激素含量。

本發(fā)明優(yōu)點如下：

由于菠菜果實不同于菠菜，具有不同藥用價值，本發(fā)明旨在建立菠菜果實真?zhèn)舞b別方法和菠菜果實中β-蛻皮激素含量測定方法，從而鑒別菠菜及其變種的真?zhèn)渭霸u價質(zhì)量，填補目前菠菜果實質(zhì)量控制技術(shù)空白，并為菠菜果實法定質(zhì)量控制標準制訂提供依據(jù)。

本發(fā)明采用化學(xué)和現(xiàn)代分析技術(shù)手段，建立菠菜果實的快速、準確真?zhèn)舞b別和基于化學(xué)活性指標成分的質(zhì)量控制體系，突破傳統(tǒng)僅憑性狀和經(jīng)驗鑒別方法控制菠菜果實真?zhèn)蝺?yōu)劣，為菠菜果實科學(xué)、準確、快速鑒定和檢測提供技術(shù)依據(jù)，基于鑒定和檢測方法，采用改進一般常用放冷過濾的方法，采取低溫冷藏處理樣品后過濾，從而減少種子內(nèi)蛋白、脂類等雜質(zhì)，創(chuàng)造性地增加了鑒別方法的靈敏度，提高鑒別可信度，使整個質(zhì)量控制體系更加完善。

本發(fā)明的菠菜果實鑒定方法建立了菠菜果實（含變種）的薄層鑒別方法，所建立的薄層色譜鑒別方法采用低溫處理濃縮樣品再過濾，除去樣品中雜質(zhì)及果實中油脂類、蛋白質(zhì)類，極大提高了薄層鑒別斑點分離度和靈敏性，所建立的薄層鑒別方法適用于菠菜變種果實鑒別，薄層鑒別方法適用性好，專屬性強，重現(xiàn)性好，可以有效檢驗菠菜果實真?zhèn)?；建立了菠菜果實（含變種）中β-蛻皮激素含量檢測方法，該方法準確性、靈敏度性高，穩(wěn)定性好，符合準確、簡便、靈敏、快速、可靠的原則，可以有效檢測菠菜果實質(zhì)量。