鱉營養(yǎng)豐富，藥用價值高，作為我國大宗、重要的水產(chǎn)養(yǎng)殖的種類，目前國內(nèi)鱉養(yǎng)殖年產(chǎn)量已達30萬噸以上，產(chǎn)業(yè)直接產(chǎn)值超過百億元，經(jīng)濟價值極高。然而隨著鱉養(yǎng)殖密度的增加、養(yǎng)殖規(guī)模的擴大，各種病害頻繁暴發(fā)，造成了巨大經(jīng)濟損失。

其中，中華鱉虹彩病毒(STIV)是從患“紅脖子病”的中華鱉體內(nèi)分離獲得的，STIV作為導(dǎo)致中華鱉發(fā)病的主要病毒性病原，致死率極高，因此研發(fā)操作便捷、成本低、耗時短、準(zhǔn)確度高的檢測技術(shù)，對于控制中華鱉STIV病毒的危害極其重要。但是目前針對中華鱉STIV病毒的的診斷方法主要是分子生物學(xué)檢測方法和免疫學(xué)檢測方法等，包括PCR技術(shù)、巢式PCR技術(shù)、熒光定量PCR技術(shù)，ELISA技術(shù)等。PCR技術(shù)檢測結(jié)果精確可靠，但卻存在操作繁瑣、耗時長、儀器試劑昂貴等不足，無法滿足現(xiàn)場快速準(zhǔn)確檢測診斷的要求。因此應(yīng)著力發(fā)展操作便捷、成本低、耗時短、準(zhǔn)確度高、可以在養(yǎng)殖場現(xiàn)場使用的中華鱉STIV病毒快速檢測技術(shù)和功能產(chǎn)品，這對于及早發(fā)現(xiàn)、確定病原，進而有的放矢地制定治療方案來控制病原擴散、降低損失至關(guān)重要。

核酸適配體是利用指數(shù)富集的配基系統(tǒng)進化技術(shù)(Systematic Evolution of Ligands by Exponential Enrichment technology,SELEX)，從人工合成的隨機序列文庫中在體外經(jīng)過多輪篩選獲得的、能夠特異性識別靶物質(zhì)的單鏈寡核苷酸。核酸適配體具有特異性高、親和性高、穩(wěn)定性強、易化學(xué)合成和化學(xué)修飾等諸多優(yōu)點。基于適配體能夠高特異性識別病原微生物或病變細胞的生物學(xué)特性，核酸適配體廣泛應(yīng)用于檢測技術(shù)開發(fā)和生物傳感器的構(gòu)建，能夠?qū)崿F(xiàn)對病原或疾病的精確檢測診斷。因此核酸適配體在疾病診斷、病毒侵染機制研究等生物學(xué)各領(lǐng)域中具有廣闊的應(yīng)用前景。

發(fā)明的目的在于提供一種核酸適配體及其構(gòu)建方法和其在檢測中華鱉彩虹病毒中的應(yīng)用，以提高中華鱉虹彩病毒的檢測水平。

本發(fā)明提供一種構(gòu)建上述核酸適配體的方法，包括以下步驟：

步驟一，提供第一ssDNA文庫和一對PCR引物，第一ssDNA文庫包含以下的單鏈DNA序列：5’?GACGCTTACTCAGGTGTGACTCG(50N)CGAAGGACGCAGATGAAGTCTC，PCR引物包括上游引物和下游引物，上游引物包括如SEQ ID NO.3所示的DNA序列，下游引物包括如SEQ ID NO.4所示的DNA序列；

步驟二，將隨機ssDNA文庫與感染了中華鱉虹彩病毒的胖頭鯉細胞共同孵育，篩選得到特異性識別中華鱉虹彩病毒的第二ssDNA文庫；

步驟三，以第二ssDNA文庫為模板，使用PCR引物進行PCR擴增，得到dsDNA文庫；

步驟四，將dsDNA文庫與被鏈霉親和素標(biāo)記的磁珠進行孵育，孵育后對磁珠進行磁性分離，然后對結(jié)合在磁珠上的特異性識別中華鱉虹彩病毒的第三ssDNA文庫進行純化與分離，得到核酸適配體。在第一ssDNA文庫的單鏈DNA序列中，兩端為固定序列，中間的“50N”表示長度為50個核苷酸的隨機序列。

與現(xiàn)有的蛋白類抗體相比，本發(fā)明通過SELEX技術(shù)篩選得到的核酸適配體對中華鱉虹彩病毒具有更高的親和力和特異性，而且還具有蛋白類抗體所不具備的特點，包括無免疫原性、制備周期短、重現(xiàn)性好、分子量小、便于體外化學(xué)合成、便于標(biāo)記、易于對核酸適配體的不同部位進行修飾和取代、序列穩(wěn)定易于運輸和保存等。采用基于本發(fā)明的核酸適配體的快速檢測方法對中華鱉虹彩病毒進行檢測時，操作簡單迅速、能夠達到較高的準(zhǔn)確率和靈敏度?？衫迷摵怂徇m配體構(gòu)建分子探針或檢測試劑盒，并結(jié)合酶標(biāo)儀、流式細胞儀、熒光顯微鏡等檢測設(shè)備，實現(xiàn)中華鱉虹彩病毒的精確檢測。這對于中華鱉STIV病毒的快速診斷具有重要意義，在中華鱉STIV病毒的檢測領(lǐng)域有良好的應(yīng)用前景。