草莓作為一種經(jīng)濟(jì)作物，其種苗的莖尖脫毒組培快繁，是一種常規(guī)采用的技術(shù)。但在草莓莖尖組培快繁的過(guò)程中，存在有操作難度大、工作效率低（在顯微鏡下，用手術(shù)工具剝離0.02mm莖尖），難以徹底消毒，組培苗污染率高。至目前，關(guān)于采用以草莓的根尖為外植體進(jìn)行脫毒和組培的技術(shù)，尚未見(jiàn)有成熟技術(shù)的文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo)。

 本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種草莓根尖脫毒與組培方法，可以解決草莓組培傳統(tǒng)莖尖脫毒技術(shù)所存在的效率低、消毒難徹底、組培苗污染率高等問(wèn)題，操作效率高、消毒徹底、組培苗污染率低。

為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是：一種草莓根尖脫毒與組培方法，該方法包括以下步驟：

1）培養(yǎng)基的制備：以MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，附加6–芐氨基嘌呤5～7.5mg/L，2,4–二氯苯氧乙酸0.3～0.5mg/L后制得pH值為5.8～6.0的根尖誘導(dǎo)培養(yǎng)基； 以MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，附加6–芐氨基嘌呤5～7.5mg/L，a–萘乙酸0.2～0.5mg/L后制得pH值為5.8～6.0的繼代增殖培養(yǎng)基； 以1/2MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，附加吲哚乙酸0.2～0.5mg/L后制得pH值為5.8～6.0的生根培養(yǎng)基；

2）材料預(yù)處理和根尖外植體的選取、滅菌：將草莓放入滅菌細(xì)沙內(nèi)于38℃±2℃下進(jìn)行熱處理4～6周至抽生出新根系；取1～2cm長(zhǎng)主根根尖，用無(wú)菌濾紙吸干表面水分，在顯微鏡下將主根根尖前端長(zhǎng)1～2mm的根尖切下作為外植體；

 3）根尖誘導(dǎo)再生植株培養(yǎng)：將外植體接種在根尖誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，在28±2℃、光強(qiáng)800lux、光照12小時(shí)/d下培養(yǎng)，至四周后其余條件不變光強(qiáng)增強(qiáng)到1600lux，六周后光強(qiáng)增強(qiáng)到3200lux，八周后光強(qiáng)減弱到1200lux下繼續(xù)培養(yǎng)直至從根尖誘導(dǎo)出再生植株幼芽，此階段總共需培養(yǎng)2～3個(gè)月；

4）幼芽增殖培養(yǎng)：將植株幼芽接種在繼代增殖培養(yǎng)基上，在28±2℃，光強(qiáng)2000～3000lux、光照12小時(shí)/d下培養(yǎng)至長(zhǎng)成8～10cm長(zhǎng)小苗；

5）繼代生長(zhǎng)培養(yǎng)：將小苗剪成2～2.5cm長(zhǎng)小段接種在生根培養(yǎng)基上，在28±2℃，光強(qiáng)2000～3000lux、光照12小時(shí)/d下培養(yǎng)至長(zhǎng)成8～10cm長(zhǎng)小苗；以后每隔3～4周將小苗按同上述方法進(jìn)行一次繼代擴(kuò)繁，直到滿足苗數(shù)要求；

6）生根培養(yǎng)：將繼代擴(kuò)增小苗接種在生根培養(yǎng)基上，在28±2℃，光強(qiáng)2000～3000lux、光照12小時(shí)/d下培養(yǎng)，1周后長(zhǎng)出根系成為完整試管苗。

本發(fā)明優(yōu)點(diǎn)如下：

1、操作容易，效率顯著提高：因?yàn)楝F(xiàn)有的草莓采用種苗的莖尖脫毒組培快繁技術(shù)，但在莖尖組培快繁的過(guò)程中，用手術(shù)工具剝離0.02mm莖尖是一項(xiàng)難度較大且工作效率低的工作，而草莓的根尖直接暴露在外，在顯微鏡下切除其根尖的尖端就十分容易，效率大大提高。

2、消毒徹底、組培苗污染率低：莖尖脫毒由于其外圍莖片不易清除，消毒難以徹底，導(dǎo)致組培苗污染率往往高達(dá)60%左右；而根尖脫毒由于其外圍無(wú)任何包裹，消毒容易徹底，組培苗污染率低。

3、簡(jiǎn)化了操作，提高了工作效率，且接種體分化好，試管苗繁殖速度快，脫毒徹底，草莓長(zhǎng)勢(shì)良好。