項目簡介

本發(fā)明公開了一種采用植物微組織直接RT-PCR檢測多種植物病毒的方法，依次包括以下步驟：（1）模板RNA提取和逆轉(zhuǎn)錄：在實體顯微鏡下，用無菌注射器針刺入待檢植物組織樣品的某一部位（莖、葉柄或根），并停留2-3秒，然后將帶有植物微組織的無菌注射器針尖直接浸入逆轉(zhuǎn)錄混合物中進行反應(yīng)，以便進行逆轉(zhuǎn)錄，得到cDNA；（2）PCR反應(yīng)：將步驟（1）得到的cDNA進行PCR反應(yīng)，得到反應(yīng)產(chǎn)物；（3）結(jié)果判斷：將步驟（2）所得的反應(yīng)產(chǎn)物進行電泳分析，得到檢測結(jié)果；

本發(fā)明方法不需要單獨步驟來分離提取待檢測樣品的RNA，能在較短的時間內(nèi)制備用于PCR反應(yīng)的RNA模板，方便快捷，且不需要儀器設(shè)備；廣譜性高，快速檢測葡萄卷葉病毒3、蘋果莖溝病毒、馬鈴薯卷葉病毒和黃瓜花葉病毒四種植物病毒，大大提高植物病毒檢測的效率和準(zhǔn)確性。本發(fā)明技術(shù)成熟，已發(fā)表SCI期刊論文1篇，國內(nèi)北大核心期刊論文1篇。

前景分析

葡萄卷葉病毒3、蘋果莖溝病毒、馬鈴薯卷葉病毒和黃瓜花葉病毒四種植物病毒在國家和地區(qū)之間的移動會給當(dāng)?shù)刂参飿?gòu)成毀滅性的打擊，造成數(shù)百萬人民幣的經(jīng)濟損失。本發(fā)明專利將有效提高植物病毒檢出率，維護我國植物安全和生態(tài)平衡，真正發(fā)揮技術(shù)保障的“把關(guān)”與“服務(wù)”職能，同時大大節(jié)省成本。投資二十多萬研發(fā)試劑盒，應(yīng)用于市場，將避免因植物病毒感染所造成的數(shù)百萬人民幣的經(jīng)濟損失。因此，在農(nóng)林種植行業(yè)、檢疫行業(yè)有極大的市場價值。

發(fā)表論文

1、Li Jing-wei, Chen Hai-yan, Li Jiao（李姣）, Wang Qiao-chun. Growth, microtuber production and physiological metabolism in virus-free and virus-infected potato in vitro plantlets grown under NaCl-induced salt stress. European Journal of Plant Pathology, 2018, https://doi.org/10.1007/s10658-018-1485-9.

2、李姣，任秋蓉，古蕾，朱曉換. 微量植物組織直接RT-PCR反應(yīng)檢測4種植物病毒的方法建立與優(yōu)化.四川師范大學(xué)學(xué)報（自然科學(xué)版），2021，44(1)：111-117.